質體DNA的純化(Purification of plasmid DNA) | Wikia生物學

少量製備質體DNA，在基因選殖(gene cloning) 是一個不可或缺的步驟，利用快速製備質體DNA，經過鑑識酵素(restriction enzyme)消化作用，電泳分析後，可以很快的篩選出 ... Wikia生物學 導覽 首頁 所有頁面 社區 互動式地圖 近期網誌 页面 最新页面 PTT統合生命科學研究院wiki 顯微鏡採購 真核生物和原核生物比較 滴丸 真核基因的表現 Peptidoglycan 糖被與莢膜 最新博客 分类 實驗 定量單位 滅菌方法 實驗儀器 限制酶實驗 細菌DNA小量製備 Transformation實驗 Ligation實驗 寄生蟲 寄生蟲 幼裂頭絛蟲 隱孢子蟲 利什曼原蟲 絲蟲 蟠尾絲蟲 豬肉絛蟲 社区 社区首页 社区中心 帮助中心 FANDOM 遊戲 電影 電視 wiki 探索wiki 社群中心 建立wiki 尚未註冊？ 註冊 登入 Advertisement 分類: 實驗 正體中文 不轉換 简体 繁體 簡體中文 disable 澳門繁體 大马简体 disable 質體DNA的純化(PurificationofplasmidDNA) 編輯 編輯原始碼 歷史 討論(0) 原理[] 少量製備質體DNA，在基因選殖(genecloning)是一個不可或缺的步驟，利用快速製備質體DNA，經過鑑識酵素(restrictionenzyme)消化作用，電泳分析後，可以很快的篩選出許多轉形的品系(clone)。

以便找出有興趣或是預期的品系，再利用大量製備法，把DNA大量製備出來，作下一步的實驗。

目前，有許多的方法可以快速製備少量質體DNA，下列兩種方法是實驗室常用的方法﹔快速沸騰法(Holmes和Quigley,1981)和鹼性溶製法(Birmboim和Doly,1979)。

近年來重組DNA的技術日新月異，有許多廠商以發展出各種不同的色層分析法，去製備質體DNA，比上述的方法省時而且DNA的品質亦比較好。

實驗器材與藥品[] 1.微量離心管 2.微量離心機 3.phenol/chloroform(1:1) 4.Isopropanol 5.Soln.I[50mMglucose,25mMTris-HClpH8.0和10mMethylenediaminetetraacetate(EDTA)] 6.Soln.II[0.2NNaOH和1%sodiumdodecylsulfate(SDS)] 7.Soln.III(3Mpotassiumacetate,pH4.8) 8.STETbuffer(8%Sucrose,5%TritonX-100,50mMEDTAand50mMTris-HCl,pH8.0) 9.Lysozyme 10.70%及95%ethanol 步驟[] 鹼性溶製法 1.取1.5ml的菌液放到1.5ml的微量離心管。

2.離心30秒。

3.丟棄上清液，加入50ul的Soln.I。

4.用Vortex振盪將菌體完全混合。

5.加入100ul的Soln.II緩慢的搖晃試管幾次，並靜置於冰浴中5分鐘。

6.加入75ul的Soln.III緩慢的搖晃試管幾次，並靜置於冰浴中5分鐘。

7.離心10分鐘(13000rpm)小心的取上層液到新的微量離心管內。

8.加入100ul的phenol上下倒置10次之後稍微離心一下。

9.加入100ul的chloroform上下倒置約100次離心5分鐘。

10.將上層的水溶液小心的取出放到新的試管內。

11.加入200ul的isopropanol搖動幾次靜置於室溫10分鐘。

12.離心15分鐘，倒掉isopropanol留下pellet。

13.用500ml的70%酒精洗，除去酒精後讓離心管斜躺在桌面上，讓DNApellet乾燥。

快速沸騰法 1.取1.5ml的菌液放到1.5ml的微量離心管 2.離心30秒。

3.丟棄上清液，加入200ul的STET/lysozyme溶液。

4.用Vortex振盪將菌體完全混合。

5.將含有細菌的微量離心管放入沸水中煮40秒。

6.在室溫下離心10分鐘。

7.下列步驟參考鹼性溶製法步驟8到10。

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