基因編輯CRISPR/Cas9 - 泓佑生物科技有限公司ACE Biolabs

... DSB)，進而達成基因敲除(Knock-out) 編輯功能。

科學家更進一步的將crRNA array以及tracrRNA結合成單一股single-guide RNA (sgRNA)，使的CRISPR/Cas9系統更容易進行 ... 客製化服務 檢測相關服務＋抗病毒試驗細胞毒性試驗內毒素含量試驗基因相關服務＋基因克隆GeneCloning基因編輯CRISPR/Cas9病毒包裝VirusPackage(Lentivirus/Adenovirus/AAV)PlasmidDNAAmplificationService基因干擾實驗服務RNAInterference(RNAi)蛋白相關服務＋客製化抗體CustomAntibodyService胜肽合成PeptideSynthesis西方點墨法代工WesternBlot酵素免疫分析法ELISA蛋白表達服務＋大腸桿菌表達系統酵母表達系統昆蟲細胞表達系統哺乳動物細胞表達系統細胞相關服務＋建構穩定細胞株StableCellLine基因編輯CRISPR/Cas9病毒包裝VirusPackage(Lentivirus/Adenovirus/AAV)細胞週期分析CellCycleAnalysis細胞馴化CellAdaptation細胞培養服務CellCultureService合成相關服務＋化合物訂製合成服務CompoundSynthesisService胜肽合成PeptideSynthesis全基因合成GeneSynthesis服務進度查詢 首頁客製化服務基因相關服務基因編輯CRISPR/Cas9   “CRISPR 並非第一種基因編輯的方式，但是是迄今為止「最精確」基因編輯的技術 ”      CRISPR為近年來發展的新興熱門技術，全名為群聚且有規律間隔的短回文重複序列」（clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats,CRISPR），其來自於細菌為抵禦病毒所發展出的免疫抵禦機制。

目前已有3套CRISPR系統(I-III)被發現，TypeI、III  而最廣泛被使用作為基因編輯的為CRISPRTypeIISystem，此套系統包含nucleaseCas9,crRNA以及tracrRNA，透過tracrRNA輔助crRNA到目標互補DNA序列上，Cas9進行雙股DNA斷裂(Doublestrandbreak,DSB)，進而達成基因敲除(Knock-out)編輯功能。

科學家更進一步的將crRNAarray以及tracrRNA結合成單一股single-guideRNA(sgRNA)，使的CRISPR/Cas9系統更容易進行操作。

    Figure:20-ntsgRNA(藍色)與scaffold(紅色)引導 Cas9nucleaes(黃色)到genomicDNA互補序列上，Cas9nuclease在5'NGG序列(PAM粉紅色)前方3個basepair進行專一性的DSB。

ref: natureprotocols|VOL.8NO.11|2013     ACEBiolabs具有台灣CRISPR專業團隊，提供設計gRNA的專業意見，並有多種gRNAplasmid可供選擇。

引進高效率電轉染技術平台，以達到最高效率、最高細胞存活率、最低off-target的機率。

- CRISPR 基因編輯服務特點 1.嶄新三條gRNA進行DSB技術，提升目標準確率 2.使用sgRNA+Cas9+Reporter三合一質體，不需像傳統嘗試不同比例。

3.運用高效率電轉染技術，縮短時程，提高成功率。

4.全方面，各類型細胞皆可操作。

- CRISPR 基因編輯服務流程     流程 項目 內容 接案 了解客戶需求 簽訂服務委託書 預付40%訂金與材料費   材料準備 細胞培養條件確認   (約3至 5週) 檢測細胞黴漿菌汙染 特異細胞株轉染條件確認。

無參考資料，需測試轉染條件。

Sp-gRNA建構   (約3至 5週) 確認基因編輯的區塊。

設計可以涵蓋該區塊的引子對，並確定PCR條件。

建構2到3個Sp-gRNA表現載體，DNA定序確認Sp-gRNAexpressioncassettes。

(0.5mg/vector) 轉染Cas9和Sp-gRNA表現載體到指定細胞株 轉染Cas9和Sp-gRNA表現載體到指定細胞株後，以抗生素篩選。

(約2至3 週) 收集總體細胞之gDNA，以PCR方法判定是否產生geneediting。

PCRproducts經TAcloning，做DNA序列分析。

(Optional) 細胞株篩選 篩選標的基因兩個alleles均破壞的細胞株 收集細胞株之gDNA，以PCR方法判定判定兩個alleles均遭破壞。

PCRproducts經TAcloning，做DNA序列分析。

(Optional) 細胞株再篩選 上述細胞株再經一次篩選 收集細胞株之gDNA，以PCR方法判定兩個alleles均遭破壞。

DNA序列分析 PCRproducts經TAcloning，做DNA序列分析 以DNA序列分析方式確認兩個alleles均遭破壞。

細胞培養至出貨規格 CRISPRKOCellLine(2x106cell/tube)凍管一管   客戶使用檢測 請於一個月內測試細胞，並告知測試結果     填寫 CRISPR服務委託書 寄至 或  與我們聯絡了解CRISPR服務方案  電話:03-2870051 email:[email protected] CRISPR相關產品Catalog#NameER1005T7EndonucleaseIER1006Cas9NucleaseER1007Cas9D10ANickase 目錄 客製化服務 產品 聯絡我們0 線上客服 詢價