T4 DNA连接酶（T4 DNA ligase），生物界的“502” - 翌圣生物

这三种方法的原理基本一样，都是利用DNA 连接酶形成磷酸二酯键来封闭DNA 片段之间的间隙。

整理小结. T4lig最早从T4嗜菌体感染的E. coli ... 首页 新闻中心 公司新闻 热门促销 产品速递 文献发表 行业资讯 产品中心 高通量测序建库 IVDPCR系列 体外转录系列 qPCR系列 逆转录 克隆系列 PCR系列 核酸提取与纯化 细胞生物学 蛋白与免疫 重组蛋白 生化试剂 实验室小仪器 实验耗材 资源下载 说明书 讲座PPT 产品目录 常见问题 关于翌圣 公司介绍 荣誉资质 联系我们 成为合作伙伴 人才招聘 COVID-19 新冠病毒(COVID-19) 德尔塔(Delta) 奥密克戎(Omicron) 生物医药 mRNA疫苗与药物 生物制药质量分析 全能核酸酶 药物发现与开发 400-6111-883 中 | EN | 翌圣商城 400-6111-883 新闻中心 首页> 新闻中心> 产品速递 公司新闻 热门促销 产品速递 文献发表 行业资讯 T4DNA连接酶（T4DNAligase），生物界的“502” T4DNA连接酶（T4Lig）在分子克隆和高通量测序文库构建中有着不可或缺的作用，目前市场上存在有多种类型的该产品，追本溯源这些产品对应的本质相同，那么对应本质到底是什么呢？     背景须知DNA 连接酶是一种能够催化相邻DNA 的3’-OH 和5’- 磷酸基末段形成磷酸二酯键，并且把两段DNA 拼接起来的核酸酶。

T4Lig是目前应用比较多的病毒基因组编码的DNA 连接酶，主要从缺失型嗜菌体中提取，噬菌体T4 的30 基因是该酶的合成基因。

 图1.DNA连接酶模拟结构图结构了解数据库中（UniProtKB登录号：P00970）显示出DNA连接酶有三个保守性结构域：DNA 结合结构域DBD（DNA-bindingdomain，M1~L129），腺苷酰化结构域AdD（adenylaitiondomain，I130~E368），寡核苷酸链结合结构域OB（oligonucleotide-binding-fold，V369~E482）。

 图2、T4lig 模拟结构，R164、R182、R359、K365 是ATP 结合位点，E217、E344 二价金属离子结合位点作用机制A 连接反应机理是基于切口双链DNA 底物得到的。

连接反应由三步完成：①T4DNAligase先由ATP供能产生E-AMP复合物；②E-AMP复合物识别双链DNA切口位置，将AMP转移到5’-P基团，形成5’-P-AMP复合物；③3’-OH亲核攻击5’-P-AMP形成磷酸二酯键，并释放出AMP. 图3、T4DNA连接酶作用原理图连接方法和主要应用利用目前已知的T4Lig的连接特点，在具体的基因工程操作中，科研人员对DNA片段的连接方法分为以下三种：（1）连接dsDNA的粘性末端：用限制性核酸内切酶酶切，形成具有黏性末端的DNA 片段，利用DNA 连接酶直接连接； 应用：载体构建，大分子条带的连接（2）连接平末端：对于平末端的DNA片段的连接常利用T4DNA连接酶连接 应用：高保真扩增后的平末端条带的连接、平末端载体构建（3）连接人为合成粘性末端：在DNA片段末端加上poly（dA）-poly（dT）尾，或化学合成的衔接物或接头，使之形成黏性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来 应用：NGS文库构建中接头的连接这三种方法的原理基本一样，都是利用DNA 连接酶形成磷酸二酯键来封闭DNA 片段之间的间隙。

整理小结    T4lig最早从T4嗜菌体感染的E.coli 提取. 后来发现DNA复制缺失型嗜菌体中连接酶产量更高，作为连接酶的主要来源。

人们发现T4的合成基因，了解作用机理，并逐步推广应用，目前市场供应连接酶主要通过基因工程方法生产，不同公司在此基础上经过不同基因位点的改造和筛选，使之对应的T4DNA酶效不断提高。

翌圣生物成立于2014年，专注于分子酶的生产和改造，是一家拥有多重酶改造技术的高新技术企业；不仅生产高质量的普通T4DNAligase，同时利用定向改造技术，将T4DNAligase的有效催化活性结构域通过多轮突变筛选，得到一种连接活性更强的突变型T4DNAligase。

普通T4DNAligase可满足日常的大部分实验，具体极高的性价比。

FastT4DNAligase具有高效的连接能力，非常适合复杂结构核酸片段的连接，如进行FFPE和cfDNA文库的构建、华大测序平台接头的连接等。

订购信息产品名称货号规格Hieff® GoldT4DNALigase(5U/µL)10300ES80/971000/50000UHieff® QuickT4DNALigase(400U/µL)10301ES4040000UHieff® FastT4DNAligase(400U/µL)10299ES4040000UHieffNGS® UltimaDNALigationModule12604ES24/9624/96THieffNGS® Fast-PaceDNALigationModule12607ES24/9624/96T参考文献：1. LohmanGJS,ChenL,EvansTC.KineticCharacterizationofSingleStrandBreakLigationinDuplexDNAbyT4DNALigase[J].JournalofBiologicalChemistry,2011,286(51):44187-44196.2. MartinIV,MacneillSA.ATP-dependentDNAligases[J].GenomeBiology,2002,3(4):reviews3005(1-7).3. Rossi,R.FunctionalcharacterizationoftheT4DNAligase:anewinsightintothemechanismofaction[J].NucleicAcidsResearch,1997,25(11):2106-2113.4. 徐广志.DNA连接酶的种类和作用机制[J].生物化工,2018,4(05):128-130.5. 贺添艳,刘亚娟,徐文选,etal.T4DNA连接酶性质及其平端连接功能[J].河南科学,2016,34(7):1058-1062.