錳型超氧歧化脢基因轉錄的調控__臺灣博碩士論文知識加值系統

語文別: 中文 ... Furthermore, the MnSOD gene, like some constitutively expressed house keeping genes, belongs to GC-rich ... the MnSOD protein expression. 資料載入處理中... 跳到主要內容 臺灣博碩士論文加值系統 ::: 網站導覽| 首頁| 關於本站| 聯絡我們| 國圖首頁| 常見問題| 操作說明 English |FB專頁 |Mobile 免費會員 登入| 註冊 功能切換導覽列 (165.22.106.144)您好！臺灣時間：2022/09/0504:55 字體大小：       ::: 詳目顯示 recordfocus 第1筆/ 共1筆  /1頁 論文基本資料 摘要 外文摘要 目次 參考文獻 電子全文 紙本論文 QRCode 本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:葉明德研究生(外文):Ming-TeYeh論文名稱:錳型超氧歧化脢基因轉錄的調控論文名稱(外文):TranscriptionRegulationofMurineManganeseSuperoxideDismutaseGene指導教授:王崇義指導教授(外文):Chung-YihWang學位類別:碩士校院名稱:國立陽明大學系所名稱:微生物暨免疫學研究所學門:生命科學學門學類:微生物學類論文種類:學術論文論文出版年:2000畢業學年度:88語文別:中文論文頁數:65中文關鍵詞:超氧歧化脢、錳型超氧歧化脢、轉錄調控、超氧自由基、自由基外文關鍵詞:superoxidedismutase、manganesesuperoxidedismutase、transcriptionregulation、superoxide、freeradical相關次數: 被引用:0點閱:160評分:下載:9書目收藏:0 人體內的氧分子大部分由粒線體(mitochondria)中的cytochromeoxidase作用，經過四個電子以及氫原子的還原後形成水分子並產生能量，但是在電子傳遞的過程中若是產生漏失(leakage)，就可能形成超氧自由基(O2˙-)並對細胞造成嚴重的傷害。

錳型超氧歧化脢是位於粒線體中的酵素，可以專一地將超氧自由基歧化成氧(O2)及過氧化氫(H2O2)，藉以清除對細胞具毒性的超氧自由基。

之前對錳型超氧歧化脢(manganesesuperoxidedismutase,MnSOD)基因研究的結果顯示MnSOD是由分布在約七千個鹼基片段的五個exons所encode。

在其近端啟動子具有一個Sp1site(-18)對於轉錄起始非常重要，而在intron2則有一個TNF反應區域，可以在細胞受到TNF刺激時引發MnSOD表現。

此外，MnSODgene的promoter和house-keepinggenes同樣都沒有GCbox及TATAbox。

根據我們以西方點墨法檢視數種細胞株的結果，MnSOD也如同house-keepinggenes一般，不需要任何刺激就可以持續地表現，顯示在MnSOD基因中存在有尚未發現的調控區域，使得MnSOD在細胞中可以持續表現。

我們針對近端啟動子序列及intron序列做系列刪除，利用DNA轉染及CAT活性試驗尋找可能的持續性調控區域。

我們在5’flankingregion沒有發現到positive或negativeregulatoryelement，但是卻在intron2中找到一個對維持CAT活性很重要的C/EBP-1site。

根據之前的研究，當細胞受到TNF刺激時，C/EBPβ會結合到這個C/EBP-1site引發MnSOD表現。

藉由電泳移動性試驗，我們發現在細胞沒有受到刺激的情形之下，結合到C/EBP-1site的蛋白質並不是C/EBPβ，我們命名為proteinX。

這些觀察顯示在細胞受到刺激前後，不同的調控因子可以藉由同一個調控區域(C/EBP-1site)調控MnSOD的表現，所以我們根據這些觀察提出一個模式解釋細胞在受到刺激前後調控MnSOD表現的機制。

在沒有受到刺激的時候，proteinX結合在C/EBP-1位置上，維持MnSOD一定程度的表現，以即時清除正常有氧代謝過程中所產生的超氧自由基；而當細胞受到刺激時，則由C/EBPβ及NFκB分別結合到TNFRE上的C/EBP位置及NFκB位置，引發MnSOD大量表現以因應刺激。

ManganesesuperoxidedismutaseisanuclearencodedmitochondrialproteinthatscavengespotentiallytoxicsuperoxideradicalsbydismutingO2˙-toO2plusH2O2.PreviousstudiesrevealedthatMnSODgeneisencodedby5exonsspanningapproximately7kbofDNA.AnSp-1siterequiredfortranscriptioninitiationintheproximalpromoterregion(-18)andaTNFresponseelementcapableofinducingMnSODexpressionafterTNFstimulationintheintron2wereidentified.Furthermore,theMnSODgene,likesomeconstitutivelyexpressedhousekeepinggenes,belongstoGC-richclassofTATA-lesspromotertranscribedgenes.WeperformedwesternblotanalysisonseveralcelllinesandfoundtheMnSODwasconstitutivelyexpressedwithoutanystimulation,suggestthereexistanunidentifiedconstitutiveregulatoryelementthatconstitutivelyregulatetheMnSODgene.DNAtransfectionandCATassaywereperformedtoidentifytheputativeregulatoryelements.Nopositiveornegativeregulatoryelementswereidentifiedinthe5’-flankingregion,butweidentifiedaC/EBP-1sitethatisrequiredforCATactivityintheintron2.PreviousstudiessuggestthatthisC/EBP-1siteboundC/EBPβandNFκBafterTNFstimulationandthusinducetheMnSODexpression.TheresultsofourEMSAstudiessuggesttheproteinthatboundC/EBP-1siteunderun-stimulatedstateisaC/EBP-relatedprotein(proteinX)ratherthanC/EBPβ.Inthisstudy,weidentifytheconstitutiveregulatorthatregulatetheMnSODexpressionunderun-stimulatedstateandpresentamodeltoexplainhowtheMnSODgeneisregulatedunderdifferentconditions.Inbasalstate,proteinXbindstotheC/EBP-1siteandtheMnSODproteinleveliskepttoscavengesuperoxidesfromnormalaerobicmetabolism.Whenstimulated,C/EBPβandNFκBbindtotheTNFREandinducetheMnSODproteinexpression. 壹.中文摘要………………………………………………………1貳.英文摘要………………………………………………………3參.緒論……………………………………………………………5肆.材料與方法…………………………………………………15伍.結果…………………………………………………………25陸.討論…………………………………………………………32柒.參考文獻……………………………………………………36捌.圖表…………………………………………………………42玖.附錄…………………………………………………………54 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