DNA 萃取實驗| Wikia生物學 - Biology

DNA為一易變性或斷裂的生物巨分子，DNA分解酶更會破壞其結構，故實驗上常將DNA ... 注意事項. DNA耐鹼不耐酸，注意phenol不要用到酸性的用寬口的tip可以稍減genome斷裂. Wikia生物學 導覽 首頁 所有頁面 社區 互動式地圖 近期網誌 页面 最新页面 PTT統合生命科學研究院wiki 顯微鏡採購 真核生物和原核生物比較 滴丸 真核基因的表現 Peptidoglycan 糖被與莢膜 最新博客 分类 實驗 定量單位 滅菌方法 實驗儀器 限制酶實驗 細菌DNA小量製備 Transformation實驗 Ligation實驗 寄生蟲 寄生蟲 幼裂頭絛蟲 隱孢子蟲 利什曼原蟲 絲蟲 蟠尾絲蟲 豬肉絛蟲 社区 社区首页 社区中心 帮助中心 FANDOM 遊戲 電影 電視 wiki 探索wiki 社群中心 建立wiki 尚未註冊？ 註冊 登入 Advertisement 分類: 實驗、​Dna 正體中文 不轉換 简体 繁體 簡體中文 disable 澳門繁體 大马简体 disable DNA萃取實驗 編輯 編輯原始碼 歷史 討論(0) 目次 1原理 2=標題文本=====實驗藥品 3大標題文字 4步驟 5注意事項 原理[] DNA為一易變性或斷裂的生物巨分子，DNA分解酶更會破壞其結構，故實驗上常將DNA置於一相似環境的緩衝溶液中，利用螯合劑減弱DNA分解酶的活性，並利用蛋白質變性劑將附著於DNA上的蛋白質分開，再溶於有機溶劑中去除蛋白質或其他雜質，又因DNA具有親水性而不溶於有機溶劑中，便可產生分層而萃取出DNA。

=標題文本=====實驗藥品[] SETbuffer(0.5%SDS、50mMEDTA、10mMTris,pH=8.0)滅菌 proteinaseK(20mg/ml)以0.22umfilter過濾RGGRGRR phenol(pH=8.0) chloroform isoamylalcohol(IAA) sodiumactate(3M,pH=7.8) isopropanol EtOH70%(rinseDNA)及100%(降低DNA的溶解度,使DNA得以沈澱) ddH2O 步驟[] 取200μLsamplesolution+500μLDNAextractionbuffer+7μLproteinaseK混合均勻。

65℃，3~4小時。

降溫至室溫，加入700μLPCI(phenol:chloroform:IAA=25：24：1)，混合均勻，緩慢上下翻轉5min。

13000rpm，25℃，5min。

吸取上清液600μL至新的eppendorf。

加入600μLPCI，混合均勻，緩慢上下翻轉5min。

13000rpm，25℃，5min。

吸取上清液600μL至新的eppendorf。

加入600μLCI(24：1)，混合均勻，緩慢上下翻轉5min。

13000rpm，4℃，5min。

吸取上清液600μL至新的eppendorf。

加入60μLNaOAc、600μLisopropanol，mixandspindown。

-80℃3小時以上。

13000rpm，4℃，30min。

移除上清液，加入1mL70 %EtOH，輕彈eppendorf底部。

13000rpm，4℃，5min。

吸除上清液。

置於60℃烘乾，pellet呈白色或透明。

加入50μLddH2O，置於60℃10min，使DNA完全溶解。

存於-20℃。

注意事項[] DNA耐鹼不耐酸，注意phenol不要用到酸性的 用寬口的tip可以稍減genome斷裂 分類：​ 實驗 Dna 增加分類 取消 儲存 除非另有註明，否則社區內容均使用CC-BY-SA授權條款。

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