蛋白质结构解析的方法简介- 实验方法- 丁香通

通常，都是将表达蛋白的基因PCR之后克隆到一种表达载体中，然后在大肠杆菌中诱导表达，提纯之后摸索结晶条件，等拿到晶体之后，工作便完成的80%，将晶体进行x射线衍射， ... 丁香通 丁香园 论坛 丁香客 医药招聘 丁香医生 更多 会议 调查派 用药助手 丁当铺 丁香搜索 医药数据库 丁香诊所 来问医生 我要登录 | 免费注册 | 我的丁香通 卖家： 成为卖家 更多合作 买家： 买家中心 移动端 发布求购 用户服务 产品 实验 品牌 搜索 搜产品 搜产品 搜实验 搜品牌 大家都在搜 搜索 发布求购 全部产品分类 首页 丁香实验new 促销 试用中心 学术专区 资讯 品牌学堂 丁香学社 试剂 🔥研选正品-丁香通研选> 生化试剂 化学试剂 生物化学 检验试剂 蛋白质类 蛋白质/抗原/多肽 蛋白检测 蛋白分析 蛋白纯化 蛋白修饰 标准品/对照品 酶 核酸类 核酸/蛋白合成 核酸分析 核酸检测 核酸纯化 DNA/RNA cDNA及合成纯化 RNAi技术 PCR/RT-PCR 分子类 文库及构建 克隆与表达 表达分析 细胞生物学检测 免疫检测 药物/生物类 药物筛选 动物/植物 微生物 饲料类 造模饲料 抗体 🔥研选正品-丁香通研选> 一抗 一抗 WB二抗 westernblot二抗 免疫组化抗体 免疫组化二抗 磷酸化抗体 磷酸化特异抗体 激酶和磷酸化抗体 亚型对照抗体 裂解液对照 组织对照 其他抗体 蛋白A，GPLUS 肿瘤抑制/凋亡抗体 信号分子抗体 结构蛋白抗体 抗体纯化 试剂盒 western 免疫组化试剂盒 放射免疫试剂盒 流式细胞试剂盒 细胞库/细胞培养 🔥研选正品-丁香通研选> 细胞库 普通细胞 原代细胞 ATCC细胞 干细胞 细胞株 细胞培养 细胞扩增 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞培养添加物 培养基/琼脂混合物 细胞因子、趋化因子和生长因子 琼脂 胰酶中和液 蛋白胨 多聚赖氨酸 氨基酸混合物 盐溶液 细胞分散试剂 消泡剂 细胞检测 细菌检测 支原体检测 支原体消除 细胞繁殖检测 导向毒素 ELISA试剂盒 🔥研选正品-丁香通研选> 动物ELISA试剂盒 人ELISA试剂盒 小鼠ELISA试剂盒 大鼠ELISA试剂盒 兔ELISA试剂盒 猪ELISA试剂盒 细胞ELISA试剂盒 细胞因子 细胞调亡 疾病检测ELISA试剂盒 心肌梗塞检测 内分泌检测 血栓与止血 肝纤维化检测 自身免疫检测 优生优育检测 传染病检测 其它 肿瘤标志物检测 激素 骨代谢 特种蛋白检测 活性多肽 其它 技术服务 分子生物学 DNA测序 DNA提取/纯化 RT-PCR服务 RNAi全套服务 分子生物学 载体构建 分子生物学整体服务 细胞生物学 细胞培养 流式细胞检测 细胞毒性测试 细胞生物学 干细胞服务 细胞因子生物检测 蛋白质相关 蛋白质组综合服务 蛋白制备 质谱服务 蛋白质相关 NMR分析 免疫学 抗体制备 抗体纯化 抗体标记 免疫组化/免疫沉淀/Western 免疫学 生物信息学 生物信息学服务 生物信息学 其他 生物芯片 生物芯片制备 蛋白芯片服务 组织芯片服务 生物芯片 微生物学 微生物鉴定 抑菌作用测试 内毒素测试 微生物学 发酵服务 病理学 病理学服务 组织学服务 病理学 动物实验 转基因动物定制 动物进出口 基因敲除 动物实验 实验整体外包 CRO综合服务 实验室定制服务 实验整体外包 耗材 🔥研选正品-丁香通研选> 常用耗材 吸头 瓶 管 微孔板 过滤 培养 PCR耗材 PCR管 PCR条板 PCR板 实时定量PCR毛细管 分子类 分子生物学膜 色谱相关 色谱柱 色谱介质 色谱配件/耗材 光谱配件/耗材 实验类 仪器配套 常用耗材 生物芯片 个人防护 手套 口罩 实验室用服 鞋帽 书籍/软件 软件 序列分析 流式分析 结构分析 图象分析 实验分析 生物芯片 凝胶分析 实验室信息化管理 仪器设备 统计 医学科研 文本分析 医用软件 网站建设及服务器 临床基础 内科学 外科学 书籍 临床医学 基础医学 药学书籍 生物医学 医学外语 医学考试 原版书 其它 生物医学 普通生物学 细胞生物学 遗传学 生理学 生物化学 生物物理学 分子生物学 生物工程学 微生物学 基础医学 医用一般科学 人体形态学 人体生理学 病理学 医学免疫学 医学遗传学 心理学 实验室仪器/设备 🔥研选正品-丁香通研选> 分析类仪器 色谱 质谱 光谱 同位素分析 测读系统 物理特性测定 显微镜 影像系统 显微镜 实验室常规 常用设备 移液器 低温制冷 清洗消毒 天平 核酸提取纯化 实验设备 基因蛋白组 环境检测 生物芯片 细胞分析 生化/细胞培养 组织学设备 电化学 分子生物学 动物实验仪器 神经生物学 医药设备 制药设备 药物检测 临床检验设备 免疫分析系统 尿液分析系统 血气分析系统 血液分析系统 生化分析系统 临床检验设备 实验室自动化 核酸提取纯化 蛋白纯化系统 全自动分液系统 全自动血液采样系统 论文服务 🔥研选正品-丁香通研选> 写作润色 专业翻译 论文写作 论文润色 课题研究 课题设计 课题申报 标书咨询 文章投稿 论文投稿 期刊选定 其他 原辅料包材 🔥研选正品-丁香通研选> 原料药 呼吸系统类 消化系统类 循环系统类 血液系统类 神经系统类 解热镇痛类 辅料 崩解剂 润滑剂 赋形剂 增塑剂 中间体 酸类 羧酸 羧酸盐 醇类 酮类 醛类 包材 输液包材 药用瓶 药用胶塞 肠溶材料 包衣材料 医疗器械 🔥研选正品-丁香通研选> 外科手术器械 基础外科手术器械 显微外科手术器械 神经外科手术器械 眼耳鼻喉科手术器械 胸腔心血管外科手术器械 腹部盆腔外科手术器械 矫形外科手术器械 妇产科及计划生育手术器械 烧伤整形手术器械 口腔科手术器械及设备材料 基本设备 普通诊察器械 手术室、急救室、诊疗室设备及器具 医用卫生材料及敷料 消毒和灭菌设备及器具 检验设备 医用电子仪器设备 医用光学器具仪器及内窥镜 医用超声激光仪器设备 医用高频及物理治疗仪器设备 中医器械 临床检验分析仪器 医用化验和基础设备器具 体外循环及血液处理设备 医用影像放射设备 其他 植入材料和人工器官 病房护理设备及器具 输液和穿刺设备 其他设备 体外诊断 🔥研选正品-丁香通研选> 生化诊断 生化诊断 免疫诊断 放射免疫 酶联免疫 胶体金 荧光免疫 化学发光 免疫印迹 免疫诊断 分子诊断 PCR 原位杂交 基因芯片 基因测序 分子诊断 微生物诊断 药敏试验 培养与形态观察 全自动微生物分解系统 微生物诊断 POCT 血糖监测类 心血管类 炎症类 凝血类 妊娠类 POCT 基因检测 基因检测 ICL-第三方医学检验 ICL-第三方医学检验 其他 临床生化检验试剂 其他试剂 首页 实验方法 蛋白质技术 蛋白分离纯化 蛋白质结构解析的方法简介 蛋白质结构解析的方法简介 蛋白质结构解析的方法简介 关键词： 蛋白质结构 解析 方法 简介 来源： 互联网 13004阅读 蛋白质结构解析的方法简介有问题？丁香实验库全新大升级，10000+实验方法任你选 前往丁香实验 到目前为止，蛋白质结构解析的方法主要是两种，x射线衍射和NMR。

近年来还出现了一种新的方法，叫做ElectronMicroscopy。

其中X射线的方法产生的更早，也更加的成熟，解析的数量也更多，我们知道，第一个解析的蛋白的结构，就是用x晶体衍射的方法解析的。

而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起来的。

这两种方法各有优点和缺点。

首先来说一下，这两种方法的一般的步骤和各自的优点和缺点。

电子显微镜（electronmicroscopy）作为一种新型的技术，目前的应用还是非常少，并且比较狭窄，我可能等到最后在给它作些介绍，而且相信绝大多数人也没有听说过，也不会有很大的兴趣。

首先是X晶体衍射。

首先要得到蛋白质的晶体。

通常，都是将表达蛋白的基因PCR之后克隆到一种表达载体中，然后在大肠杆菌中诱导表达，提纯之后摸索结晶条件，等拿到晶体之后，工作便完成的80%，将晶体进行x射线衍射，收集衍射图谱，通过一系列的计算，很快就能得到蛋白质的原子结构。

用x射线的优点是：速度快，通常只要拿到晶体，甚至当天就能得到结构，另外不受大小限制，无论是多大的蛋白，或者复合体，无论是蛋白质还是RNA、DNA，还是结合了什么小分子，只要能够结晶就能够得到其原子结构。

所以x射线方法解析蛋白的瓶颈是摸索蛋白结晶的条件。

这个时候运气就显的特别重要。

关于这个有好多有趣的离子。

据说国外一个同学在摸索两个月无果之后，毅然去度假，就将蛋白扔在一个很随便的地方，等度假回来之后，却发现已经结晶了。

然后，来说一下NMR。

NMR（nuclearmagneticresonance）现象早已发现了很久，然后将这种方法用来解析蛋白结构，却是近一二十年的事情。

不过到今天为止，用NMR方法来解析结构已经十非常成熟的方法。

原理暂且放在一边，先说常规步骤。

首先通过基因工程的方法，表达出目的蛋白，提纯之后，摸索一下蛋白稳定的条件，如果蛋白没有聚合，而且折叠良好，便将蛋白样品（通常是1mM～3mM，500ul，pH6～7的PBS）装入核磁管中，放入核磁谱仪中，然后用一系列写好的程序控制谱仪，发出一系列的电磁波，激发蛋白中的H、N13、C13原子，等电磁波发射完毕，在收集受激发的原子所放出的“能量”，其实也是小磁场，通过收集数据、谱图处理、电脑计算从而得到蛋白的原子结构。

它的优点就是，蛋白在液体中得到结构，是一个动态的结构，事实上所有在PDB中或者文献中发表的NMR结构都是十个或者二十个结构的ensemble（集合），这就是因为这些结构都是进行能量优化后符合条件的结构，或者说就是溶液中的蛋白结构。

因为是动态就很容易的研究蛋白与其他蛋白或者配基的相互作用。

缺点是，受大小的限制，到目前为止NMR解析蛋白结构的上限是50kd。

无论是晶体还是NMR，蛋白都要符合下面的条件：首先表达量要大，像NMR要求1个mM500μl，这就要求十几个毫克，结晶要摸索很多的条件也需要大量的蛋白。

所以蛋白一定要在胞质中表达才行。

其次，蛋白要折叠。

我们知道许多蛋白，尤其是真核蛋白在大肠杆菌中是以包含体的形式存在，这种情况下是不行的，除非复性。

如果你的蛋白在胞质中表达，如果你不确定是不是表达，可以从分子筛上的位置，或者扫CD确定一下，当然最简单的是做一个NMR一维谱，只需要几分钟。

小于20Kd的蛋白可以考虑NMR，因为NMR研究功能核相互作用方面是更加擅长的，而且不需要结晶，现在速度也不慢。

如果比较大，可以考虑晶体解析。

对于用NMR来解析结构，最重要的条件就是非常昂贵的核磁谱仪，以及同位素标记蛋白。

只要采集了谱之后就算的得到了原始数据，其他的在电脑上通过专业的软件处理就可以了。

对于小分子蛋白不需要同位素标记，也不需要600、800MHz的谱仪，一般的400、500MHz的小型谱仪也可以做了，但是对于10K以上的蛋白，基本上就要用磁场更强的600、800Mhz的核磁谱仪。

超方便的实验干货查询工具 微信扫码进入「丁香实验」小程序 经验交流 chengxue727 为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致 做这个实验的时，我同一批次提取的蛋白，胶跑出的条带都不一致，这是什么原因呢？   43 评论 jianchi20 WB敷牛奶需要的时间  WesternBlot实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗   42 评论 grass010 WB发光结果异常 我做WB也不算是新手，自己觉得整个过程也没有什么明显的问题，可是最后发光的时候内参整个是晕开的，分子还连成了一条线，之前没出现过这种情况，所以想请大家帮忙分析下，是胶的问题，蛋白的问题，还是什么别的，谢啦！   28 评论 感兴趣的产品 蛋白质结构解析服务 蛋白质晶体结构解析 多维核磁共振解析蛋白质结构 真皮乳头细胞 PBS缓冲液干粉 凝胶色谱柱 hif2a抗体 物理光学仪器 pan02细胞株 细胞耐药性检测 质谱 章鱼胺试剂盒 感兴趣的厂家 蛋白质结构解析服务厂家 蛋白质晶体结构解析厂家 多维核磁共振解析蛋白质结构厂家 真皮乳头细胞厂家 PBS缓冲液干粉厂家 凝胶色谱柱厂家 hif2a抗体厂家 物理光学仪器厂家 pan02细胞株厂家 细胞耐药性检测厂家 质谱厂家 章鱼胺试剂盒厂家 版权声明 本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。

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