FLP FRT 重组系统与Mosaic 杂交实验（1） - Coursera

Video created by 北京大学for the course "遗传学实验". 介绍基因功能研究策略的背景知识，以被誉为果蝇遗传学家瑞士军刀的Gal4-UAS系统原理和灵活多样的使用为基础， ... ListFLPFRT重组系统与Mosaic杂交实验（1）Loading...遗传学实验北京大学免費註冊此課程視頻腳本本课程的实验设计贯穿以研究基因功能为目的遗传学思维理念及精髓。

通过背景知识的介绍和相关的实验操作，使大家建立这样的理念：研究基因功能时，在分子水平通过敲除或者敲入的策略，使基因突变或者修饰，这些突变依赖载体染色体的传递，将稳定地传给下一代。

通过设计精巧的遗传杂交实验，追踪易于识别的染色体标记，就可以定位目的基因、获得纯合突变体，研究表型与基因型间的对应关系，从而理解各种表型的分子机制。

整个实验过程涉及生物学不同学科知识和实验设计的融合。

针对遗传学研究的这些关键点，本课程设计了一系列实验，主要以模式动物果蝇为窗口，通过遗传杂交实验，以遗传信息传递的载体染色体为线索，除验证遗传学基本定律外，还引入科研项目的理念和实验环节，以便让大家参与平时在课堂上接触不到的真实科研实践。

每次实验包括背景原理、目的介绍、操作要点和相关的视频演示。

让学生亲自保管和观察杂交果蝇培养瓶，写生活史观察日记也是本课程的特色之一。

学生，尤其是高年级本科生和进入国内外科研第一线的研究生，均反馈受益非浅。

参考教材为由张文霞主编，高等教育出版社出版的《遗传学实验指导》。

此外相应的实验将提供参考文献。

MOOC实验课虽然无法亲自操作，但我们将提供丰富的图片和视频资料，使大家了解其过程。

有实验条件的选课人员，可以依照讲解和演示，亲自操作。

查看授課大綱從本節課中实验七利用FLP/FRT重组系统获得纯合突变克隆，Mosaic杂交实验介绍基因功能研究策略的背景知识，以被誉为果蝇遗传学家瑞士军刀的Gal4-UAS系统原理和灵活多样的使用为基础，说明如何通过遗传策略实现目的基因的敲除（敲低）或过表达。

转基因果蝇的构建流程和如何利用平衡染色体定位转基因发生在哪条染色体上；果蝇复眼和翅（作为基本问题研究的窗口）的特点介绍等。

具体实验：利用简单高效的FLP/FRT重组系统，通过遗传杂交获得纯合突变克隆，实现体内对纯合突变基因（包括致死基因）功能的研究。

FLPFRT重组系统与Mosaic杂交实验（1）34:34FLPFRT重组系统与Mosaic杂交实验（2）25:39子一代杂交及去亲本1:53教學方张文霞AssociateProfessorWenxiaZhang,PhD以免費的價格試聽課程今天呢，我们实验课的内容呢是要再做一个杂交实验，然后呢，这个杂交实验呢我们是利用这个果蝇的FLP/FRT的这个重组系统，然后呢我们来获得这个纯合的突变克隆。

然后呢同时呢，我们要介绍这个果蝇里边用的最普遍也是从理念设计上来说，是通用的这么一个叫GAL4-UAS系统然后背景呢，给大家介绍一下，然后目的呢是通过一些就是说背景介绍以及我们的杂交实验，让大家呢，就是说知道，通过遗传杂交的方式，我们怎么能获得这个基因的敲低，或者是敲除，这样的目的[空白音频]好，首先呢我们还是要给大家介绍一下这个基本概念那么我们最开始呢，给大家讲的时候呢，遗传学实验突变体的获得是很关键的然后拿到突变体以后呢，我们要进行表型分析那么不管是通过正向遗传学还是反向遗传学的方式，我们拿到突变体以后呢，就是说进行下一步的研究的时候呢，其实呢从策略上来说的话这个不外乎是两个策略。

一个策略呢就叫Lossoffunction，也就是说敲低或者是敲除这么一个思路。

另外一个方式呢，是什么呢，就是叫Gainoffunction也就说我们在敲除或者是敲低然后呢，没有表型的情况下，然后呢，我们就可以想办法呢，把这个基因再放一个拷贝然后呢到个体里边，看看它的表型是什么那么最常见的大家知道MicroRNA听说过吧，那么绝大部分的MicroRNA的话，它的作用呢其实是起抑制作用然后你敲掉它以后呢，你看不到表型但是呢，有些MicroRNA的话，然后呢我们过表达然后呢去看它的表型的话，就可以看得到了。

那么在这个敲除的这块的话这个早期的那个正向遗传学呢，我们提到过，用X射线啦，或者是EMS啦，这些方法都可以获得，另外呢，还有呢就是那个我们可以把那个想办法，就是说，在果蝇里边的话，就是用P因子然后呢，就是说在基因组里边跳，然后呢就可以插入到这个基因组的某个地方，然后呢就可以破坏这个基因的这个基因序列，或者是上游的调控序列，这样的区域也可以造成突变，那么果蝇里边呢有这么一个大的那个P因子的那个库那么还有一种办法呢就是说，你针对这个插入的某一个品系然后呢，你要想让它呢，继续地把它这个片段敲除掉的话，我们还可以让这个P因子呢再给它跳出来然后啊，这样的话，也可以达到基因敲除的目的好，那么现在这个反向遗传学我们已经知道好多基因的序列然后呢，我们就可以通过一些其他的手段，比方说同源重组的办法还有呢，就是说，TALEN的办法，还有最新的发展的就这几年，然后呢发展起来的CRISPR和Cas9的这个系统然后的话，就是说做到这个很精确地定点地敲除基因，而且呢速度也加快那么，敲低的话我们也给大家提到过，就是那个RNAi在线虫里边最开始是呢，因为这个技术呢就获得了诺贝尔奖，是吧，那么在这，这个呢一个我们通过敲低的办法看表型的一种方式好，那么在那个Gainoffunction里边的话，就是说，这个基因呢可以在原位给它过表达，也可以在异类的表达，也就是说它如果在其他地方表达的话，仍然起同样的作用这样的话，我们也可以证实这个基因的功能是什么好，另外我们还有两个概念也想让大家知道，就是说你们看文献的时候呢，应该注意到就是说你们会看到，做的这个实验的话，是Invitro还是Invivo的，是吧这个一般情况下，我们在体外做的一些实验生化的实验呀这些呢，都叫InVitro因为在体外做的实验的话，它究竟在体内是不是起相同的作用还不知道，必须得放到体内去做，也就是说放到个体水平去做，比方说我们在果蝇里边，线虫里边，斑马鱼里边做这都是InVivo水平的工作好，说到这个研究基因的话，我们要让这个基因表达，所谓基因表达呢就是说DNA，然后呢转录成RNA，然后呢，再翻译成蛋白，然后呢在体内才起作用，是吧好，在那个果蝇里边呢，我们有一个系统呢，叫GAL4-UAS系统这个系统呢，在这个果蝇里边是用得相当普遍的另外呢就说设计理念上边呢，我们也可以就说后边的很多一系列的实验的话，其实有些理念是共通的所以呢，我们以这个系统为例，给大家呢一些背景的知识好这里呢，大家可以看到，就说这个眼睛的话我们通过人为的方法，让这个控制眼睛的，在果蝇里边的这个基因叫eyeless就是说eyeless这个，这么拼的，eyeless，e-y-e-l-e-s-s然后呢，这个基因让它异位表达你们可以看，这个在果蝇的足上边在果蝇的触角上边，在果蝇的翅膀上边，都会长出眼睛来这就是一个过表达，也就是异位表达的例子怎么能做到这个呢，我们下边呢就给大家介绍这个GAL4-UAS系统一个基因要表达的话，最关键的是什么呢一个基因上要有调控序列，是吧然后如果它表达的时候呢，要有什么起作用呢你们学过转录因子吗就说在分子生物学上边的话就说，要调控基因的表达的话就说，一定要有一个转录因子，结合在基因的这个上游的调控序列的区域然后呢，在这种情况下呢才会表达。

那么，这个GAL4呢就是转录因子的一种那么在最开始研究的时候呢，其实这个GAL4结合在这个基因的上游序列这个呢，是在酵母里边做出来的，在80年代，酵母里边做出来的后来呢，陆续的呢，在这个果蝇里边，在其他物种里边呢，也发现了同源的GAL4的这个分子，同样也会在同一个物种里边呢，它有相应的调控序列好，大家呢只要记住这个，要有转录因子结合在基因的调控序列的上边，就可以启动基因的表达，记住这个就可以。

那么，在果蝇里边呢这个93年的时候呢，这个发明了这个GAL4-UAS系统，它是怎么做呢，它是把这个我们所研究的目的基因在上游呢，加上这个GAL4结合的这个序列，我们把它叫作UAS也就上游激活序列，然后呢，这样一个元件呢，连在一起的这个元件呢，做成一个转基因的果蝇那么，另外呢，把GAL4，转录因子的这个元件呢，我们呢做成另外一个果蝇，两个转基因果蝇。

然后呢，如果需要它们两个需要这个我们所研究的基因要表达的时候呢，然后呢让这两个果蝇一杂交就可以了，然后呢这个基因呢就会表达好，究竟这个基因表达在什么位置呢取决于什么呢，取决于这个GAL4的上游呢结合了一段序列，这段序列呢是一个什么序列，启动子它是组织或者是细胞特意表达的序列就是说，我们如过想让刚才我们说的想让这个基因表达在这个足或者翅膀上边的话，我们就在这个GAL4的前边呢，加一个在足或者翅膀里边特异表达的那个基因的启动子就可以了。

如果是想让它表达在眼睛里边，那么就是说GAL4的那个上游的那个Promoter呢，加的是什么？加的是眼睛里边特异表达的那个Promoter好，所以呢，在这个果蝇里边设计的时候呢，它就是把起作用的两个元件做成两个转基因果蝇然后呢我们呢可以，需要它表达的时候呢我们从时间上就可以控制，让它一杂交就可以了，那么位置呢可以从这个GAL4前边的那个Promoter然后来决定它究竟表达在什么地方好，所以刚才我们看到的这张图的话，实际上呢是我们让眼睛这个基因，eyeless的这个基因呢前面呢加了一个UAS然后呢让它表达在什么地方呢？表达在这个你们看，现在我们表达在什么地方？表达在翅膀足和这触角上边，然后呢，现在这个DPP呢它就是一个表达在这个肢体的这些地方的一个分子的启动子所以呢，我们把它两个元件一杂交，然后呢我们就可以看到这样的现象好现在我们看到的这个呢，是我们让这个Ras这个基因大家知道Ras基因是什么基因吗？Ras基因是个癌基因是个onco基因，是个癌基因。

我们让这个癌基因呢表达，那么在它的前边呢加一个UAS这个序列然后呢在什么地方表达呢？我们让这个癌基因呢在眼睛里边表达，在GAL4前边呢加上这个eyeless的这个基因好，这样两个基因，然后让它一杂交的话你们可以看到眼睛里边表达了癌基因以后整个这个眼睛的形态特征完全就不一样了然后呢它上边呢不规则的，另外呢还会长一些刚毛。

这个实验呢我们是前几年就是，也就是咱们本科生的遗传学实验课的时候呢同学们杂交做出来的。

那么我们今天实验课呢，我们做另外一个杂交好，刚才我们说了GAL4-UAS系统呢，我们可以从时间和空间上来控制这个基因的表达，是吧？但实际上呢，就是说你从时间上控制的话，只是控制了主要杂交以后表达，但是杂交以后什么时间段表达的话，其实呢刚才那个呢还做不到，是吧？那么另外呢，经常在果蝇里边呢，引进一个什么东西呢？引进一个叫GAL80这么一个分子，那么这个分子呢，在19度的时候它是结合在这个GAL4上边的，所以呢这个GAL4的话即使是结合在UAS上边，但是呢因为这个GAL4呢对、GAL80呢对它是起一个抑制作用所以的话，这个目的基因也不会表达因为这个GAL80呢它是温度敏感型的，那么如果我们放在30度的时候这个GAL80呢，就会这个离开这个GAL4这样的话，GAL4呢就会起作用，然后呢下游的基因就会表达。

所以呢，从这一点上来说的话，我们可以从时间上来控制，就是我们什么时候想让它表达的时候呢，我们只需要加热一下，然后呢就可以了就是说我们从时间、空间上边可以控制这个基因的表达[空白_录音]这个GAL4-UAS系统呢，不仅可以达到过表达的目的，而且呢还可以达到敲低等基因的目的那么大家可以看，这一块呢我们就是在UAS的下游呢加上你所要的那个基因的那个双链的RNAi的序列我们现在呢加的是eyeless的这个序列，然后呢，让它呢跟GAL4杂交，就是说你想让它在什么地方敲低，你就用什么样的GAL4来跟它杂交。

那么现在我们看到的这个呢，杂交以后，这就是它的表型大家可以看一下，敲低这个基因以后呢，所看到的表型跟这个基因敲除以后的表型是完全一样的下边这张图呢是把翅膀上边的一个控制这个刚毛的这个即兴的一个基因，也是把它敲低了敲低了以后呢，我们看到的表型也是跟突变敲除以后的效果是一样的这样的话，就是说果蝇里边这个用RNAi的这个办法的话做这样的杂交敲低的话，实际上呢就是说进行起来很方便。

那么果蝇遗传学家呢，实际上呢在早期的时候呢，已经给我们做了很多这个基因的RNAi的这个序列，就是说把RNAi的这个序列，不同基因的序列都接在这个UAS的下游。

那么这里呢，我给大家有两个网站衔接其中一个呢，是那个维也纳的那个果蝇库，另外一个呢，实际上是美国的那个印第安纳的那个果蝇库。

那么实际上印第安纳的这果蝇库里边呢，也包括了维也纳的那个果蝇库的信息那么大家可以看到，就是说到目前为止，实际上呢基本上90%以上的这个基因全部做成了UAS下游把它加上这个编码蛋白的基因这样的那个品系，在库里边呢都能找得到所以呢，如果你要做某个研究然后呢你就可以，比方说我想要在眼睛里边筛选相关的基因，我就把它所有的这些UAS、RNAi的这个line全部订购来，然后呢你就用那个GAL4这样的品系跟它杂交，最后呢你就看不同的表型这样来筛选，就是说很方便的。

就是说在研究的时候呢，一般情况下的话，大家呢认可的是什么？敲除但是呢，在果蝇里边的话，这个RNAi库这么方便，所以的话做简单的筛选的话，做简单的筛选工作的话，其实呢用RNAi库来做的话是很方便的好我们刚才看到的好多表型都是肉眼可见的，但是呢就是说在身体体内或者是透明的情况下，我们肉眼看不到的时候呢，其实呢我们可以把某一个组织或者是细胞用GFP来标记，是吧？那么果蝇里边呢UAS-GAL4系统呢同样可以做到这样，然后呢把这个GFP呢上游呢加一个UAS这样一个序列做成一个果蝇，然后呢你想让它在什么地方表达，你就用什么样的GAL4来杂交就可以了。

那么现在我们显示的是什么呢？这是果蝇的一个脑子，把那个几丁质外壳给它去掉以后，然后呢果蝇的脑子。

那么我们现在让这个GFP表达在什么地方呢？表达在这个果蝇的蘑菇体里边果蝇的蘑菇体呢是跟这个记忆相关的。

所以呢，你们可以看这个是蘑菇体被GFP标记。

所以呢，你不同的神经元，脑袋里边的不同的神经元，然后呢都可以做这样的GFP标记。

不管你是作为哪个基因的研究，你都可以让这个基因的上游的那个Promoter然后呢加到GAL4的前边，这样的话把那个所研究的那个基因的神经元，就可以用GFP来标记上了，就可以观察了那么现在呢大家呢那个什么用这个confocal还有tophoto的这个工具，然后呢，都可以看到这个特别精细的一些结构同时，我们用GAL4-UAS系统呢，还可以操纵神经元的活性也就是说，我们可以把目的的神经元可以给它激活或者是失活，那么激活的时候呢，常用的是一个阳离子通道的一个分子，然后呢上游呢加了一个UAS序列然后呢这个，它这个是热敏感的，所以的话，只要那个跟GAL4一杂交，然后呢热激以后呢，它就会这个离子通道就给打开，然后呢神经元就会激活了，好如果失活神经元的话，实际上呢，我们是在UAS的下游呢加了一个Shibire这样一个分子序列，这个分子序列呢也是热敏感的它是控制什么呢？它是控制这个督促上边的囊泡释放的，如果是这个基因突变以后呢，这个囊泡的释放就会有问题这样的话，这个地址的传递呢，这个信息传递呢就会有问题，所以的话就达到这个神经元失活的目的了。

好，我们这里给大家看的这个例子呢是这个上次呢我们上课的时候呢给大家讲了，就是说可以观察这个果蝇的这个求偶行为或者是打架行为，是吧？我记得我提到，就是说雄性的这个求偶行为的话，它会什么它会一个翅膀伸起来，是吧？然后呢会会动，就这个动的这个频率的话相当于是那个情歌似的，然后呢它去追这个雌的你们观察的时候看到了吗？看没看到这个行为？呃这个是这个野生型的，是这样的那么大家可以看右侧的这个，右侧的这个呢是我们是让这个神经元失活，你看UAS呢后边加的是Shibire这样一个序列。

然后呢让什么样的神经元失活呢？TPHTPH是一个什么呢？它是五羟色胺的一个合成酶好，这样一个GAL4和UAS杂交以后呢就把这一类型的神经元就给它失活了。

失活以后大家可以看一下这个，我们失活以后呢这个是热激以后，失活以后，杂交以后的那个统计，统计数据，然后呢显著地增高而非热激的时候呢没有任何变化，好，那么这个子树代表的是什么呢？这个果蝇呢会，我们看一下，野生型呢雄性的在追雌性的时候呢，它一边追一边翅膀会伸开，是吧？好，大家可以看一下这个盘子里边的这个这个果蝇呢一个追一个，而且呢前后这个果蝇呢都是伸开翅膀的，而且都是雄的雄的呢它不去追雌的了，它是追雄的而且呢这个果蝇呢是排成队的，而且呢还会转圈所以你看这儿有一个ChainingIndex这么一个子树好，你们可以看，通过这样的要让神经元失活的办法的话，我们都可以看到这个行为的改变好所以呢这个UAS-GAL4系统的话在果蝇里边的话，我们经常说，这个像是一个果蝇遗传学家的瑞士军刀它什么都可以干，只要你设计的好。

那么这儿呢给大家有一篇文章，大家可以去看一下，这里边呢有不同的设计然后呢可以达到不同的目的，只要你设计的好然后的话，只是UAS-GAL4这个系统就可以解决很多的问题那么这里呢给大家演示的呢是什么？在这个印第安纳的那个Bloomington的这个果蝇中心，然后呢有一个库，然后呢GAL4的库刚才已经说了，我们UAS又多了一个不同的库然后呢那个GAL4的话也有不同的line在这个库里边，然后呢大家呢想研究什么样的分子或者是组织特异性的这个功能的话，你们就可以找不同的这个GAL4，然后呢把它订购来，我们进行研究[空白音频]其实呢在这个印第安纳的这个果蝇中心的话这个网站上边的话提供了很多的不同的果蝇然后呢这些工具果蝇的话，你们可以看，我们拥有GAL4的，拥有UAS的，还有GAL80的然后呢我们今天呢一会还讲到这个FRT和FLP的这个系统的一些果蝇，还有我们刚才提到的RNAi，还有CRISPR这样的一些果蝇在这个网站里边呢都可以找得到。

另外呢，我们还也讲过这个Balancer，是吧？然后呢不同的果蝇呢也可以在这里边去找到。

所以呢，在果蝇里边的话，其实呢就是说大家呢，就是说学了不同的知识，然后呢你们有想法了以后然后呢我们就可以设计自己的实验。

那么设计了以后呢，其实很多果蝇都是现成的，只要你设计的好然后呢你就可以找现成的这个果蝇，然后呢打开网站，然后呢一点，然后呢我们就订购来然后呢果蝇来了以后呢，我们就可以做杂交了大家呢也学了怎么来做杂交，怎么来选处女蝇，是吧？好，那么这么多转基因果蝇怎么做出来的？我们简单地给大家介绍一下果蝇的转基因是怎么做的那么最常用的这个把我们的目的基因带入到基因组里边的载体呢用的是什么？用的是P因子，这就是那个P因子的骨架然后呢这个是转座酶的这个骨架。

然后呢这里边的话，除了我们所要想带入的这些不同的分子元件，然后呢其中呢还带着一个什么？叫marker基因，也就是说我们要怎么来识别的问题，将来怎么识别的问题，我们用的就是那个mini-white我们看到那个突变体的时候呢，看到那个橘黄色的眼，是吧？那就是橘，那个mini-white它的表型，好那么注射呢我们是注射的是果蝇的卵那个被注射的这个果蝇呢，它的眼睛的颜色呢应该是什么颜色的呢白色的，白色的，我们注射的载体里边带的marker呢基因呢是橘黄色的，这样的话，只要它进入到基因组里边遗传下来了，我们就可以看到，诶，只要看到红眼的了，然后呢就说明我们所转的这个片段进入了基因组里边去了好，那么产下的这个卵注射的时候呢，其实呢就是说，并不是随便来注射的，就是说跟时间和位置有很大的关系好，从时间上来说大家知道这个果蝇的卵在最开始分裂的时候呢，其实呢它是细胞核一直在分离但实际上呢它并不是马上就分，它是形成一个合胞体并不是形成一个一个的细胞的，然后呢这些不同的这些细胞核的话都会围绕着这个整个卵的那个外缘来排列到这个后期，大概是到这个发育的第四、第五期的这个时期，然后呢这个时期的话才会，细胞膜才会包上去，形成一个一个的细胞的所以呢，我们要注射的时候呢，一定要敢在这个细胞膜包上的时候让它呢进入到细胞核里边，就是说注射的这个载体要让它进去，好，这个时间呢一般是产卵以后呢，大概是1到一个半小时之内，也就是说不要超过一个半小时然后呢产卵以后呢赶紧去注射，这个时候的话就会包在这个细胞里边去，好那么如果能遗传得下去的话，应该是插入到什么样的细胞里边呢才能通过遗传传下去呢？是不是应该是生殖细胞，是吧？如果是在体细胞里边的话，你是传不下去的，对吧？所以呢，我们要看这个生殖细胞在这个卵呢在卵上边的哪个位置大家可以看一下这个图，这上边呢是原位杂交然后呢显示的这个深颜色的，这就是那个生殖细胞所在的位置，是在卵的尾部的这个地方好，那么我们上次给大家看的时候呢，那个记得那个卵然后呢前面有两个飘，是吧，呼吸器官，是不是？那是头部尾部呢是在它的对面，要注射在尾部的地方。

所以呢，我们时间要掌握在一个多小时以前一定要注射，另外一个呢，我们要注射它的在它的尾部好，这个卵呢发育成成虫的时候呢如果是它已经插入到基因组里边了，这个时候我们看到的果蝇是红眼呢还是白眼呢？就是说我们注射的是卵，然后呢这个卵呢又发育，到幼虫，到蛹，最后呢又羽化出成虫来了，红眼还是白眼？应该是白眼，是吧？因为这个时候呢，这个细胞呢应该是什么？就是说个别细胞是含有这个插入的那个基因组的有些呢是没插入的，它是一个勘合的细胞，勘合的个体，是吧？那么在这个时候呢需要经过杂交那么在这个时候呢一般情况下都是单个的个体分别养在不同的果蝇瓶里面如果它是雄的，你去去跟那个雌的去杂交；如果是雌的，你就跟雄的去杂交一定要单个单个的，一个个体和一个个体是不一样的然后呢，经过杂交一代以后呢，最后呢，只要出现红眼的，那肯定是它是插入到生殖细胞里边然后呢整个个体呢全部都是相同的基因型，然后呢我们就可以看到眼睛是红颜色的了这样呢我们就可以拿到转基因果蝇了好，你们算一下，我们从这个果蝇产卵到发育成成虫，多长时间？多长时间？十多天是吧？好，那么再杂交一代呢？又十多天，所以的话，二十多天的话我们就可以完成这个整个果蝇的转基因的构建的过程了。

好这个拿到红眼了，说明我们的目的基因已经进入到这个总系里边去了，对吧？但是呢，究竟插入在哪个染色体上？我们还不知道，是不是？所以呢，在这个时候呢，我们呢就可以用我们看过的，我们用到的这个平衡染色体第一染色体、第二染色体、第三染色体的平衡染色体分别跟它们去杂交然后呢来判断究竟是在第几染色体上，插入的是第几染色体上好，所以呢我们需要大家回去呢，这个设计一下杂交然后呢，利用那些平衡染色体，然后呢来设计杂交，看拿到的这个红眼的果蝇究竟是在第几染色体上什么样的情况下是位于第一染色体什么样的情况下是位于第二，什么情况下是位于第三染色体你们自己去设计，然后呢把杂交图做出来然后呢，就可以来做一些判断。

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