腺相關病毒載體服務 - 生物技術研究中心- 國立臺灣大學

目前腺相關病毒(adeno-associated virus, AAV) 為小病毒科之無包膜單股DNA 病毒，為人類中常見的感染源，但是AAV 感染對人體並不會造成症狀或疾病。

重組腺相關 ... 腺相關病毒載體服務 首頁/技術服務/腺相關病毒載體服務 腺相關病毒載體服務 源起 CBT-LS-AAV由臺灣大學生物技術研究中心與生命科學系於2016年協同成立，於2017年正式開始接受專案服務。

第一任實驗室主持人為生命科學系助理教授陳示國老師。

服務說明 目前腺相關病毒(adeno-associatedvirus,AAV)為小病毒科之無包膜單股DNA病毒，為人類中常見的感染源，但是AAV感染對人體並不會造成症狀或疾病。

重組腺相關病毒(rAAV)只保留外衣殼基因，原致病基因已被轉殖基因所取代，已成為極具潛力的基因轉殖工具。

優點為可以於模式生物體內表達，不同血清型可感染特定宿主細胞，不易引起明顯的免疫反應。

目前本服務設施提供的rAAVtiter1~2x1011vg/ml，已可到達國外各知名大學病毒載體服務設施標準(1x1011vg/ml)。

優勢：rAAV為一有效且快速的轉殖基因載體，適合做為探討某一基因的生理功能或基因治療的研究工具。

配合近年來發展的RNAinterference、CRISPR/Cas9及Optogenetics技術，rAAV也可達到類似基因knock-down、knock-out和knock-in小鼠的效果。

但優點是可快速的在1~2個月內製備完成，具有時效上的優勢。

另外，應用帶有兩種以上基因的rAAV，可在小鼠的特定組織或器官內表達多種轉殖基因或剔除多種目標基因，使基因功能研究更具彈性。

配合應用：(1)配合CRISPR/Cas9(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats/CRISPR-associatedprotein9)技術：利用不同的Cas9system包括LentiCRISPRv2,SpCas9和AAV-Cas9針對一般細胞株、primaryculture、幹細胞或活體小鼠做基因組編輯(genomeediting)。

(2)配合Optogenetics相關蛋白應用：光通道蛋白(photoreceptor)是一種受特定波長光源刺激後會打開的離子通道，如Microbialchannelrhodopsinorhalorhodopsin，以rAAV表現於特定神經細胞上後，利用光調節神經細胞的反應。

此系統提供一個可精準控制的研究工具。

(3)血清型選擇：血清型(serotype)是由衣殼的結構蛋白的類型進行分類，並具有組織特異性。

其中血清型2(rAAV2)對於神經細胞組織感染率很高，血清型9(rAAV9)有廣泛組織感染性，是目前於研究中廣泛使用的血清型。

不同血清型具有不同組織的特異感染性。

使用者可依本身實驗的需求選擇適當的血清型，並配合適當的注射方式，即可在特定的器官內大量表現轉殖基因。

此服務設施目前提供rAAV2與rAAV9病毒載體。

注意事項 1.rAAV生物操作安全等級為RG1，除特殊轉殖基因需於BSL2以上實驗室操作，一般可於BSL1生物安全操作櫃進行實驗。

為了避免危害操作人員健康及生物安全，請勿表現對人類具有感染性的病原、致癌基因或對人體有危害之RNA、蛋白質。

客製化專案申請請附上｢基因重組實驗申請同意書｣。

2.請確認transgenecassette(包含promotor,targetgene,etc.)小於4.7kb。

申請前，使用者請務必確認含目標基因rAAV的質體具有表現能力(invitroexpression)。

3.欲客製化rAAV者需提供足夠量之MaxiPreparationpAAV-targetgeneplasmid，平台可提供適合的backboneplasmid供使用者做cloning。

4.保存方法：長期保存：rAAV可長期保存於攝氏-80度，建議使用者於第一次解凍時分裝，保存於-80度冰箱，使用者需自備乾冰運送。

短期保存：rAAV可於-20度中保存1~2週，titer並不會有顯著改變。

收費標準 本服務平台宗旨為提供校內研究服務。

收費如下：客製化rAAV：(1)客製化rAAV產量測試：因轉殖基因的差異會影響rAAV產量，申請前須先進行產量測試，方可大量生產，每次收費3,000元。

(2)校內使用者一單位20,000元，校外教學研究使用者一單位25,000元。

保證產量為1*1011vg/mL。

製備從測試起至交貨約需4~6週，但交貨順序依使用者提申請的先後順序出貨。

常備rAAV：平台提供一些可隨時購買的rAAV，校內使用者一單位(100uL)4,000元，校外教學研究使用者一單位5,000元，保證產量為1*1011vg/mL。

付費方式：本服務以研究專案方式報價、計費。

檔案下載 專案申請書 立即下載    聯絡資訊 詳細樣本製備問題，請聯絡技術員何映技士[email protected]本服務委由生命科學系之腺相關病毒載體服務設施技術平台協助執行，相關資訊請參考下方連結：http://www.lifescience.ntu.edu.tw/2016/link.html?s=AAVcore