克隆載體(Cloning Vector):通常採用從病毒 - 中文百科知識
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我們把經過改造完成的能運送目的基因的載體稱為克隆載體。
作為克隆載體最基本的要求是:①具有自主複製能力,否則目的基因就無法進行克隆;②攜帶易於篩選的選擇 ...
克隆載體 克隆載體(CloningVector):通常採用從病毒、質粒或高等生物細胞中獲取的DNA作為克隆載體,在載體上插入合適大小的外源DNA片段,並注意不能破壞載體的自我複製性質。
將重組後的載體引入到宿主細胞中,並在宿主細胞中大量繁殖。
常見的載體有質粒,噬菌粒,酵母人工染色體。
克隆載體克隆載體(CloningVector):通常採用從病毒、質粒或高等生物細胞中獲取的DNA作為克隆載體,在載體上插入合適大小的外源DNA片段,並注意不能破壞載體的自我複製性質。
將重組後的載體引入到宿主細胞中,並在宿主細胞中大量繁殖。
質粒是染色體外自主複製的遺傳因子,多為閉環DNA分子,天然存在於細菌、真菌細胞內,質粒可以自發地從一個細菌遷移進入另一個細菌。
宿主細胞指的是目的基因進行克隆的細胞,例如人的生長激素基因導入大腸桿菌進行克隆,大腸桿菌細胞就是生長激素基因的宿主細胞。
如果目的基因的宿主是細菌或真菌,通常用質粒做目的基因的載體,特殊情況下用噬菌體做載體;如果宿主細胞是動植物,載體通常選取病毒或染色體DNA構建。
我們把經過改造完成的能運送目的基因的載體稱為克隆載體。
作為克隆載體最基本的要求是:①具有自主複製能力,否則目的基因就無法進行克隆;②攜帶易於篩選的選擇標記,用於篩選成功的重組DNA,淘汰未重組的空載體;③載體應儘可能小,便於導入細胞和進行繁殖;④使用安全。
迄今為止,已經通過天然質粒、病毒等構建了多種克隆載體,例如1977年Boliver等從天然質粒出發,經刪除、融合、轉座及重排等操作,構建成功了適合多種用途至今仍廣泛使用的克隆載體pBR322,它全長4361bp,含兩個抗性基因,用於重組後的篩選,具有天然質粒的複製起始點(圖8-1-3)。
如果目的基因較大,需要構建病毒克隆載體,常見的是λ噬菌體克隆載體。
相關詞條 T載體克隆 T載體克隆,重組的DNA分子是在DNA連線酶的作用下,有Mg2、ATP存在的連線緩衝系統中,將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連線。
實驗原理 實驗準備 試劑配製 實驗過程 黏粒克隆載體 40Kb左右的外源DNA片段。
由於黏粒載體帶有噬菌體的包裝序列,可以用包裝蛋白包裝,不帶外源DNA片段的載體因為包裝下限而不能被包裝,具有很強選擇性。
... 噬菌體載體 噬菌體主主要有雙鏈噬菌體和單鏈絲狀噬菌體兩大類。
雙鏈噬菌體為λ類噬菌體,單鏈絲狀噬菌體有M13、f1、fd噬菌體。
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